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申请/专利权人：福建师范大学
摘要：本申请涉及一种针对单纯疱疹病毒1型（HSV‑1）的基因改造新方法，名为CRISPR‑V。HSV‑1作为双链DNA病毒，由于其在肿瘤基因治疗中的潜力，被广泛用于靶向肿瘤治疗。然而，现有的HSV‑1基因改造方法耗时且复杂，限制了其发展。目前，该领域面临的最大挑战是同源臂载体的构建过程，这导致重组溶瘤病毒的构建时间过长，资源浪费严重。本发明提出的CRISPR‑V方法结合了CRISPR技术和荧光筛选技术，并对其敲入载体的同源臂长度进行了改造，避免了大片段同源臂构建的问题。通过该方法，可以快速且精准地对HSV‑1的基因进行编辑，包括基因敲除和外源基因的定点插入，从而大幅缩短了病毒改造的时间。这一创新将有助于节约时间成本，并推动溶瘤病毒领域的快速发展。
主权项：1.一种HSV-1病毒基因改造的方法，其特征在于：包括如下步骤：1将用于特异基因的sgRNA插入到CRISPR载体上构建HSV-1基因编辑载体CRISPR-KO-X；2利用一步PCR法构建用于HSV-1病毒基因编辑的同源臂载体HR-X，所述同源臂长度为50bp；3将含有HSV-1基因组特异位点的CRISPR载体CRISPR-KO-X、同源臂载体HR-X和HSV-1病毒导入到293T细胞，48h后收集细胞上清再次感染VERO细胞；再过36h后，利用荧光显微镜找到荧光噬斑，并用枪头挑选出来进一步感染野生VERO细胞，即得到基因编辑的HSV-1病毒。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 福建师范大学 一种HSV-1病毒基因改造的方法
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