买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：东曜药业有限公司

摘要：本发明涉及生物医学分析技术领域，尤其涉及一种检测CHO细胞宿主蛋白残留的试剂盒。本发明试剂盒利用CHO宿主细胞蛋白作为标准品和抗原制备抗体，具有特异性高、灵敏度高、检测效率高的特点，可同时检测多个样品，定量限达到5ppm，使用设备简单，操作方便，检测成本低。

主权项：1.一种检测CHO细胞宿主蛋白残留的试剂盒，其特征在于，包括：包被有CHODG44捕获抗体的酶标板、生物素标记的CHODG44报告抗体和酶标记的链霉亲和素；所述CHODG44捕获抗体和CHODG44报告抗体识别均由CHO宿主细胞蛋白作为免疫原免疫兔子制得，两种抗体识别CHO宿主细胞蛋白不同的抗原表位；1.1所述CHO宿主细胞蛋白免疫原的制备方法为：1.1.1模拟实际生产工艺培养细胞：复苏构建的CHODG44冻存细胞，使用HM003培养基摇瓶培养，传代至450mL以及细胞活率在90％以上结束，转移至5升罐继续培养；1.1.2收集细胞：3,000xg，30min离心收集包含CHO-HCP抗原的上清液，并使用0.2微米的无菌薄膜进行无菌化过滤；1.1.3蛋白浓缩：对过滤好的上清液进行浓缩，先使用新的8KD浓缩包进行浓缩，然后使用Millipore的TFF蛋白浓缩系统进一步浓缩，并使用PBS进行透析，最终产品为PBS溶解的蛋白溶液；1.2兔抗CHO宿主细胞抗体的制备方法为：CHO宿主细胞蛋白免疫12只兔子，每只兔子每次注射2.5mg的CHO宿主细胞蛋白，第一次注射时，每1ml蛋白混合1mlFreund完全佐剂，之后每次注射时，每1ml蛋白混合1mlFreund不完全佐剂，采用多点注射，共免疫10次；以该方法获得的免疫血清作为捕获抗体的来源；以CHO宿主细胞蛋白作为免疫原免疫兔子制得的CHODG44抗体为多克隆抗体，选择一部分多克隆抗体作为捕获抗体包被酶标板，用于捕获待测样本中的抗原；选择另外一部分作为报告抗体，用于检测和定量CHO宿主细胞蛋白；所述检测CHO细胞宿主蛋白残留试剂盒的方法，包括以下步骤：步骤1：用CHODG44捕获抗体包被酶标板；步骤2：向步骤1制得的酶标板中加入待测样本和标准品溶液，孵育，洗涤；步骤3：向步骤2洗涤后的酶标板中加入生物素标记的CHODG44报告抗体，孵育，洗涤；步骤4：向步骤3洗涤后的酶标板中加入酶标记的链霉亲和素，孵育，洗涤；步骤5：向步骤4洗涤后的酶标板中加入显色液显色，孵育，加入终止液终止反应，于450nm波长下测定吸收度值；所述酶标记的链霉亲和素为辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素；所述显色液为TMB；所述终止液为硫酸溶液；所述标准品为CHODG44宿主细胞蛋白；所述试剂盒的定量限达到5ppm；所述试剂盒的抗CHO宿主细胞蛋白抗体的覆盖率达到CHO宿主细胞蛋白的72％；所述试剂盒检测的范围为20ngmL～600ngmL。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 东曜药业有限公司 一种检测CHO细胞宿主蛋白残留的试剂盒及检测方法