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申请/专利权人：中国医学科学院药用植物研究所云南分所

摘要：本发明公开了一种嘉兰染色体核型的分析方法，具体包括以下步骤：1根尖处理；2染色体制片；3荧光原位杂交：①染色体检查；②染色体变性；③梯度脱水；④探针变性；⑤探针杂交；⑥洗脱；⑦信号检测与图像获取；⑧回收；⑨图像处理；4核型分析。本发明首次利用4种寡核苷酸探针5SrDNA、45SrDNA、AG3T33和拟南芥类型端粒重复序列来构建嘉兰FISH核型，对嘉兰染色体的核型细节进行了分析，最终确定了嘉兰染色体组中rDNA和端粒重复的数量和位置，揭示了每条染色体末端的结构完整性等。

主权项：1.一种嘉兰染色体核型的分析方法，其特征在于，具体包括以下步骤：1根尖处理待嘉兰幼苗根长至1～2cm时，将生长旺盛的根尖剪下，放入离心管，N2O处理，冰醋酸固定，保存；2染色体制片将处理后的根尖进行清洗，吸掉水分，置于载玻片上切下根尖分生区，酶解，清洗，脱水，加入乙酸，捣碎制成悬浮液，滴于新的载玻片上，风干，镜检，标记，保存；3荧光原位杂交①染色体检查：将载玻片烘干，检查中期染色体分裂相是否完整；②染色体变性：将含有较好分裂相的载玻片放入氢氧化钠混合液中，水浴变性；③梯度脱水：将载玻片在浓度梯度的乙醇中处理，风干，备用；④探针变性：将FISH杂交液体系进行变性，然后转移至无水乙醇中处理，得到变性探针混合液；所述FISH杂交液体系包括探针和杂交缓冲液；所述探针包括TAMRA标记的5SrDNA、FAM标记的45SrDNA、FAM标记的AG3T33和TAMRA标记的端粒重复序列TTTAGGG3；⑤探针杂交：将变性探针混合液滴于载玻片上标记的染色体区域，盖上盖玻片，孵化；⑥洗脱：清洗，洗去盖玻片，再次清洗，风干，染色，盖上盖玻片；⑦信号检测与图像获取：检测杂交信号，采集图像；⑧回收：揭掉盖玻片，沸水浴处理，然后在浓度梯度的乙醇中处理，风干，曝光，保存；⑨图像处理；4核型分析至少30个染色体分散均匀、形态清晰且数目完整的体细胞中期染色体分裂相被用于染色体数目确定，至少有3个质量较好的分裂相被用于核型和杂交信号模式的分析，最后，结合形态，着丝粒位置、杂交信号特征，所有染色体按长度排列，从最长的染色体到最短的染色体。

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