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摘要：本发明公开了一种用于检测HEK293细胞中iPSC残留的引物探针组合及其应用，涉及生物制品中多能干细胞残留检测技术领域。本发明针对检测基因SFRP2和ZSCAN10，以及内参基因GAPDH，设计了相应的检测引物和探针；还提供了利用这些检测引物进行qPCR‑染色法或利用这些检测引物探针进行qPCR‑探针法，检测HEK293细胞中iPSC残留的方法，以及相应的检测产品。采用本发明的引物探针组合和检测方法，能够从经过培养7天后的HEK293细胞中检测出0.0001%的iPSC残留，具有非常高的检测灵敏度和特异性。
主权项：1.一种检测HEK293细胞中iPSC残留的方法，其特征在于，包括步骤为：提取待测样本中细胞的RNA，对所述RNA进行反转录，得到反转录产物cDNA，对cDNA进行qPCR扩增；设计检测基因SFRP2的第一引物组合和第一探针，设计检测基因ZSCAN10的第二引物组合和第二探针，设计检测内参基因GAPDH的第三引物组合和第三探针；利用第一引物组合和第一探针检测qPCR扩增产物中的基因SFRP2表达，或者利用第二引物组合和第二探针检测qPCR扩增产物中的基因ZSCAN10的表达；利用第三引物组合和第三探针检测qPCR扩增产物中的内参基因GAPDH的表达；计算获得待测样本和HEK293细胞标准品的中基因SFRP2或ZSCAN10的表达量，以基因GAPDH作为内参基因，比较待测样本与HEK293细胞标准品的SFRP2或ZSCAN10的表达差异，判断待测样本中iPSC的残留情况；所述第一引物组合的第一正向引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，第一反向引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述第二引物组合的第二正向引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，所述第二反向引物的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；所述第三引物组合的第三正向引物的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示，所述第三反向引物的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示。
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百度查询： 武汉珈创生物技术股份有限公司 一种用于检测HEK293细胞中iPSC残留的引物探针组合及其应用
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