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申请/专利权人：深圳市伯劳特生物制品有限公司

摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及幽门螺杆菌免疫保护制剂及其在制备免疫牛乳中的应用。本发明提供了包括幽门螺旋杆菌、幽门螺旋杆菌的天然抗原和重组抗原的幽门螺旋杆菌的免疫保护制剂，以及采用所述免疫保护制剂制备的免疫牛乳。本发明提供幽门螺杆菌和相关蛋白只是作为免疫原刺激乳牛产生相应抗体，不会直接入血，更不会进入牛乳中，本发明提供的免疫牛乳没有毒副作用，对健康没有潜在危害，抗体没有毒副作用，也不会产生耐药性，可以长期应用，同时牛乳作为载体，产量大、更加经济实用，适于推广应用。

主权项：1.免疫牛乳的制备方法，其特征在于，取幽门螺旋杆菌的活菌饲喂16月龄黑白花奶牛和取所述幽门螺旋杆菌的天然抗原和重组抗原对16月龄黑白花奶牛进行注射免疫；进行抗原免疫前，使用东莨菪碱和奥美拉唑对待免疫乳牛进行干预1周，东莨菪碱1g次，每日2次；奥美拉唑1g次，每日2次；所述活菌饲喂奶牛包括：将幽门螺杆菌在培养基上复苏，然后传代，微需氧37℃培养3天，收集幽门螺杆菌活菌培养液50mL×109CFUmL，将上述含新鲜活菌培养液掺入到空腹1日的东莨菪碱和奥美拉唑干预后的免疫乳牛的饲料中，每日三次，连续喂饲7天；所述幽门螺旋杆菌的天然抗原的注射免疫包括：取所述幽门螺旋杆菌，经溶菌酶裂解、超声破碎后收集裂解上清和沉淀，所述沉淀经尿素溶解、离心，所述离心后的上清经透析后获得沉淀上清，混合所述裂解上清和所述沉淀上清获得所述幽门螺旋杆菌的天然抗原，然后加等量的弗氏完全佐剂，将幽门螺菌抗原裂解上清充分乳化，每只乳牛取30mL上述乳化抗原进行免疫，四肢的近心端分别皮下注射上述乳化抗原5mL，然后乳牛臀部每侧注射上述乳化抗原5mL，三周和六周后依据前述方法进行加强免疫一次；所述重组抗原的注射免疫包括：取幽门螺杆菌重组抗原尿素酶A、尿素酶B、空泡毒素、细胞毒素以及热休克蛋白混合后，加等量的弗氏完全佐剂乳化，每只乳牛取30mL上述乳化抗原进行免疫，四肢的近心端分别皮下注射上述乳化抗原5mL，然后乳牛臀部每侧注射上述乳化抗原5mL，三周和六周后依据前述方法进行加强免疫一次；所述重组抗原中，尿素酶A的氨基酸序列如SEQIDNO:11所示；尿素酶B的氨基酸序列如SEQIDNO:12所示；空泡毒素的氨基酸序列如SEQIDNO:13所示；细胞毒素的氨基酸序列如SEQIDNO:14所示；热休克蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:15所示；在上述活菌喂养的同时，对免疫乳牛同时使用幽门螺杆菌天然抗原和重组抗原进行混合免疫。

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