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申请/专利权人：华东师范大学

摘要：本发明提供了一种基于生物层干涉的高通量群体靶向类固醇雌激素检测方法，能够实现对水中类固醇雌激素的高灵敏群体靶向识别检测。通过指数富集配体系统进化技术筛选获得类固醇雌激素的核酸适配体，并对其进行核苷酸特异性编辑，构建第一适配体和第二适配体。将第一适配体固定于链霉亲和素传感器表面，第二适配体特异性结合靶标类固醇雌激素形成第二适配体‑类固醇雌激素复合物。在检测过程中，链霉亲和素传感器上的第一适配体捕获第二适配体‑类固醇雌激素复合物，导致传感器尖端生物层厚度变化，由此引发的波长偏移可定量水中类固醇雌激素的浓度。该方法可同步识别雌酮、17β‑雌二醇和炔雌醇，检测浓度范围为0.001~1nM，检测时间为10分钟。

主权项：1.一种基于生物层干涉的高通量群体靶向类固醇雌激素检测方法，其特征在于，对指数富集配体系统进化筛选获得的适配体进行核苷酸编辑，获得第一适配体和第二适配体；然后用生物素标记第一适配体，并将其固定在链霉亲和素传感器表面；第二适配体在检测孔板与类固醇雌激素特异性结合形成第二适配体-类固醇雌激素复合物；链霉亲和素传感器表面固定的第一适配体捕获第二适配体-类固醇雌激素复合物，通过链霉亲和素传感器尖端的光学厚度增加引发的波长偏移分析定量水中类固醇雌激素浓度，具体包括：（1）对指数富集配体系统进化筛选获得的类固醇雌激素适配体进行核苷酸编辑，构建碱基数为33-56bp的类固醇雌激素群体靶向第一适配体和第二适配体；所述类固醇雌激素包括雌酮、17β-雌二醇、炔雌醇；（2）用生物素标记步骤（1）中构建的类固醇雌激素群体靶向第一适配体；第一适配体的浓度为125-1000nM；生物素浓度为4-6µM；（3）将步骤（1）中构建的类固醇雌激素群体靶向第二适配体与类固醇雌激素在PBS+MgCl2缓冲溶液体系中混合，MgCl2浓度为1-3mM，反应在96孔板里进行，类固醇雌激素与第二适配体发生结合反应生成第二适配体-类固醇雌激素复合物溶液，第二适配体浓度为125-500nM，结合时长为150-300s；（4）将链霉亲和素传感器放置在步骤（2）所得生物素标记的靶向第一适配体溶液中，使第一适配体偶联于链霉亲和素传感器表面，制备固定有第一适配体的链霉亲和素传感器；（5）将步骤（4）所得固定有第一适配体的链霉亲和素传感器浸泡在生物素溶液中，封闭链霉亲和素传感器上尚未发生结合的亲和素位点；（6）将步骤（5）中的生物素封闭的链霉亲和素传感器浸泡在步骤（3）类固醇雌激素群体靶向第二适配体-类固醇雌激素复合物溶液中，链霉亲和素传感器表面固定的第一适配体捕获溶液中的第二适配体-类固醇雌激素复合物，引起链霉亲和素传感器表面的光学厚度增加，引发干涉波长偏移，通过检测响应信号定量类固醇雌激素浓度，检测浓度范围为0.001~1nM。

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