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申请/专利权人：上海万子健医学检验实验室有限公司

摘要：本发明属于临床检验领域，具体涉及一种基于双衍生技术同时检测18种类固醇激素的试剂盒及方法。将所述系列校准品使用液、所述系列质控品使用液和血清样本中分别加入内标液；随后向各样本中加入蛋白沉淀剂和样本萃取液，萃取液中加入样本增强液1进行肟化反应；继续加入样本增强液2和样本调节液进行酯化反应；反应结束后，反应液离心，取上清，上清进行LC‑MSMS检测。本发明采用一种双衍生法同时检测多种类固醇激素，质谱检测时无需正负切换，也无需磁珠或SPE等高值耗材，即可实现在常规液相色谱‑串联质谱平台上同时检测雌激素和其他类固醇激素，拓展了类固醇激素检测方法的临床适用性。

主权项：1.一种基于双衍生技术同时检测18种类固醇激素的试剂盒，其特征在于，所述类固醇激素为11-脱氧皮质醇、脱氢表雄酮、皮质素、18-羟皮质酮、孕烯醇酮、17-羟孕烯醇酮、17-羟孕酮、孕酮、皮质醇、21-脱氧皮质醇、醛固酮、睾酮、雄烯二酮、皮质酮、雌酮、雌二醇、雌三醇和硫酸脱氢表雄酮；所述的试剂盒包含如下试剂：1系列校准品：所述的系列校准品为具有六个不同浓度水平的系列校准品工作液的冻干物，所述系列校准品工作液为已知浓度的类固醇激素混合工作液用第二溶剂稀释而成的具有六个不同浓度水平的的校准品工作液；其中，所述校准品工作液的六个浓度水平为：孕烯醇酮、孕酮、雌二醇、雌三醇、21-脱氧皮质醇、醛固酮、睾酮的浓度相同，6个浓度依次为0.05ngmL、0.125ngmL、0.25ngmL、1.25ngmL、5ngmL、10ngmL；17-羟孕烯醇酮、17-羟孕酮、11-脱氧皮质醇、皮质素、雄烯二酮、皮质酮、脱氢表雄酮的浓度相同，6个浓度依次为0.1ngmL、0.25ngmL、0.5ngmL、2.5ngmL、10ngmL、20ngmL；雌酮和18-羟皮质酮的浓度相同，6个浓度依次为0.02ngmL、0.05ngmL、0.1ngmL、0.5ngmL、2ngmL、4ngmL；硫酸脱氢表雄酮的6个浓度依次为：50ngmL、125ngmL、250ngmL、1250ngmL、5000ngmL、10000ngmL；皮质醇的6个浓度依次为：1ngmL、2.5ngmL、5ngmL、25ngmL、100ngmL、200ngmL；2系列质控品：所述的系列质控品为具有两个不同浓度水平的系列质控品工作液的冻干物，所述系列质控品工作液为已知浓度的类固醇激素混合工作液用第二溶剂稀释而成的具有两个不同浓度水平的质控品工作液；其中，所述质控品工作液的两个浓度水平为：孕烯醇酮、孕酮、雌二醇、雌三醇、21-脱氧皮质醇、醛固酮、睾酮的浓度相同，2个浓度点分别为0.2ngmL和7.5ngmL；17-羟孕烯醇酮、17-羟孕酮、11-脱氧皮质醇、皮质素、雄烯二酮、皮质酮、脱氢表雄酮的浓度相同，2个浓度点分别为0.4ngmL和15ngmL；雌酮和18-羟皮质酮的浓度相同，2个浓度点分别为0.08ngmL和3ngmL；硫酸脱氢表雄酮的2个浓度点分别为200ngmL和7500ngmL；皮质醇的2个浓度点为：皮质醇的2个浓度点分别为4ngmL和150ngmL；3内标液：所述内标液为已知浓度的各类固醇激素标准内标品储备液混合，并用第三溶剂稀释成内标液；所述内标液中11-脱氧皮质醇-d5、17-羟孕酮-d8、皮质酮-d8、雄烯二酮-d7、睾酮-d3、皮质素-d8、雌酮-d4、雌二醇-d5、雌三醇-d3、孕烯醇酮-d4、醛固酮-d7、18-羟皮质酮-d4、孕酮-d9、21-脱氧皮质醇-d8、17-羟孕烯醇酮-d3、皮质醇-d4的浓度为200ngmL，脱氢表雄酮-d6浓度为1μgmL，硫酸脱氢表雄酮-d6浓度为4μgmL；4样本萃取液：正己烷、甲基叔丁基醚和乙酸乙酯中的任意一种或几种的组合；5蛋白沉淀剂：乙腈与甲醇任意体积比的混合溶剂；6样本调节液：0.1molL碳酸钠水溶液和0.1molL的碳酸氢钠水溶液的体积比为1：9～9：1的混合溶液；7样本增强液1：盐酸羟胺溶液，溶液中的溶剂为10vt％～20vt％甲醇水溶液或10vt％～20vt％乙腈水溶液，溶液中盐酸羟胺的浓度为0.5molL～5molL；8样本增强液2：1,2-二甲基咪唑-5-磺酰氯溶液，溶液中溶剂为丙酮或乙酸乙酯，溶液中1,2-二甲基咪唑-5-磺酰氯的浓度为0.2mgmL～5mgmL；9流动相A：0.1vt％甲酸水溶液；10流动相B：含有0.1vt％甲酸的甲醇溶液或含0.1vt％甲酸的乙腈溶液；所述校准品和所述质控品的冻干工艺依次顺序包括预冻阶段、升华干燥和解析干燥；所述的预冻阶段的操作条件如下： 所述的升华干燥的操作条件如下： 所述的解析干燥的操作条件如下： 或者，所述校准品和所述质控品的冻干工艺依次顺序包括预冻阶段、升华干燥和解析干燥；所述的预冻阶段的操作条件如下： 所述的升华干燥的操作条件如下： 所述的解析干燥的操作条件如下：

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