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申请/专利权人：沈阳航空航天大学
摘要：本发明涉及分子计算领域，尤其涉及DNA核酶切割技术，具体涉及DNA核酶侵入式切割双链以调控立足点方法。该方法通过加入特定的E6‑typeDNA核酶来实现对DNA核酶侵入式切割双链中的立足点区域进行动态增加。利用该方法，设计了一套受DNA核酶调控的基于蛋白质‑核酸的逻辑运算系统。且DNA核酶由原先的以切割DNA单链为主，拓宽至可以侵入式切割双链，提供了一种新的DNA核酶切割方法，可广泛应用于基因工程、生物传感器以及纳米技术。
主权项：1.DNA核酶侵入式切割双链的方法，其特征在于，包括：步骤1：设计目标DNA双链复合物由“底物”链X、“在位”链Y基于碱基互补配对原则相互结合而成；其“底物”链X上带有立足点域h、切割位点“TrAGG”和DNA片段b、c、d；DNA片段b、c、d及切割位点“TrAGG”作为“在位”链Y的杂交结合域；DNA片段b、c均隐藏在DNA双链结构之中，立足点域h片段暴露在外；步骤2：基于E6-typeDNA核酶，设计DNA核酶链Dz，DNA核酶链Dz上设有发卡结构，发卡茎部对应为Dz上DNA片段m及其互补DNA片段m*，发卡环部对应Dz上DNA片段n；步骤3：根据所述立足点域h和DNA片段b的碱基排序，设计互补的DNA序列，作为DNA核酶一侧的底物结合臂；根据DNA片段c，设计互补的DNA序列，作为DNA核酶另一侧的底物结合臂；步骤4：将“底物”链X和“在位”链Y退火杂交，得到目标DNA双链复合物[X,Y]；步骤5：加入Dz，Dz与[X,Y]上暴露的立足点域h结合后，引发分支迁移，从而侵入式结合X，直到Dz与X完全结合时，在切割位点“TrAGG”处将X裂解成两段；输入链Dz由于和c域结合的部分短，在切割后会和X-1作为双链废物脱落，分支迁移被置换掉一部分的Y会和X-2重新杂交，形成一个带有新的立足点域b*的双链复合物，最终实现了DNA核酶侵入式切割双链。
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