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申请/专利权人：杭州百殷生物科技有限公司
摘要：本发明实施例涉及核酸检测技术领域，具体为一种快速原位杂交检测方法及其应用，包括以下步骤：S1、抗DNA‑RNA杂合体抗体的制备；S2、原位杂交检测；通过脱蜡，蛋白酶消化，探针杂交，抗DNA‑RNA杂合体抗体免疫，DAB或快红显色，苏木素染液复染，返蓝，脱水，透明，常规封片等步骤。配合抗DNA‑RNA杂合体小鼠单克隆抗体，该抗体与DNA‑RNA杂合体分子的结合具有高特异性和高灵敏度，能够特异性地识别和检测细胞中被探针特异性识别的DNA或RNA序列，在检测DNA‑RNA杂合体时呈阳性高表达。该抗体可应用于荧光原位杂交检测、ELISA检测、抗体芯片制备、流式细胞术等检测与筛查领域，有利于获得准确的评估和检测结果。
主权项：1.一种快速原位杂交检测方法，其特征在于：包括以下步骤，S1、抗DNA-RNA杂合体抗体的制备；S2、快速原位杂交检测；所述步骤S1中的抗DNA-RNA杂合体抗体的制备包括以下步骤，S1.1、免疫动物；以100μgmlDNA-RNA杂合体和100μgml甲基化的牛血清白蛋白按质量比1:1在10mlTE缓冲液中进行混合，按每只Balbc小鼠30μgDNA-RNA杂合体的量与弗氏完全佐剂乳化，腹部皮下注射，第14天和第28天分别加强免疫一次，第35天，经小鼠尾巴取血进行检测；S1.2、制备杂交瘤细胞系；取免疫小鼠淋巴细胞经细胞融合、克隆筛选，获得可高效分泌抗体的阳性杂交瘤稳定细胞株，从杂交瘤细胞系中分离出总RNA；S1.3、获得抗体序列；将总RNA逆转录成cDNA，利用特异性的引物，通过PCR扩增技术获得抗体重链可变区和抗体轻链可变区的核苷酸序列；S1.4、抗体表达和纯化；将所述核苷酸序列克隆至表达载体中，使用转染方法瞬时转染培养的细胞，培养后收集上清，使用蛋白AProteinA纯化上清液，得到纯度95％的抗体。
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权利要求：
百度查询： 杭州百殷生物科技有限公司 一种快速原位杂交检测方法及其应用
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