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申请/专利权人：徐州医科大学附属医院

摘要：一种用于肿瘤标志物CYFRA21‑1SERS检测的免疫生物芯片及其制备方法，该芯片包括位于上层的SERS探针和位于下层的免疫基底；制备方法为：采用MB标记AuNRs@Ag，活化后再修饰上CYFRA21‑1A抗体得到SERS探针；在Fe3O4@GO基底上修饰CYFRA21‑1B抗体，然后识别不同浓度的CYFRA21‑1得到Fe3O4@GO免疫基底；将Fe3O4@GO免疫基底浸入到SERS探针中，室温下孵育，用PBS清洗掉未连接的SERS探针，得到免疫生物芯片。该芯片特异性强，能对基底上吸附的CYFRA21‑1特异性识别，可应用于CYFRA21‑1的高效灵敏检测，提升SERS的灵敏度和选择性。

主权项：1.一种用于肿瘤标志物CYFRA21-1SERS检测的免疫生物芯片，其特征在于，该芯片包括位于上层的SERS探针和位于下层的免疫基底，所述SERS探针是标记MB和修饰CYFRA21-1A抗体的AuNRs@Ag，所述免疫基底是表面修饰CYFRA21-1B抗体和CYFRA21-1的Fe3O4@GO免疫基底；所述免疫生物芯片的制备方法包括如下步骤：（1）SERS探针的制备：采用MB标记AuNRs@Ag，活化后再修饰上CYFRA21-1A抗体得到SERS探针；具体步骤如下：将0.1mL浓度为0.01M的MB溶液与0.9mL浓度为2.36mgmL的AuNRs@Ag溶液混合，以250rpm的转速旋转2h，然后以8000rpm的转速离心10min并洗涤数次后分散于1mL浓度为0.01M的PBS溶液中，得到MB标记的AuNRs@Ag纳米棒分散液；将50μL浓度为100mM的EDC和80μL浓度为100mM的NHS加入到1mLMB标记的AuNRs@Ag纳米棒分散液中，在室温下低速摇晃30min，然后用0.01M的PBS洗涤两次，再分散到1mL浓度为0.01M的PBS中，得到活化后的MB标记的AuNRs@Ag纳米棒分散液；向活化后的MB标记的AuNRs@Ag纳米棒分散液中加入100µL浓度为100µgmL的抗CYFRA21-1A，于4°C下孵育12h，再加入50μL、浓度为3%的BSA作为阻断剂，于4°C下孵育6h，离心后分散在1mL浓度为0.01M的PBS中，得到SERS探针；（2）Fe3O4@GO免疫基底的制备：在Fe3O4@GO基底上修饰CYFRA21-1B抗体，然后识别不同浓度的CYFRA21-1，得到Fe3O4@GO免疫基底；具体步骤如下：将100μL浓度为5mgmL的磁性氧化石墨烯分散体分散在1mL浓度为0.01M的PBS溶液中，再加入100µL浓度为100µgmL的CYFRA21-1B抗体，在4℃下孵育12h以上；再加入50μL、浓度为3%的BSA作为阻断剂，于4°C下孵育6h，最后磁分离收集免疫Fe3O4@GO底物重悬于1mL浓度为0.01M的PBS中；取100µL免疫Fe3O4@GO底物滴入2mL离心管中，然后在离心管中加入40µL不同浓度的CYFRA21-1标准溶液，在室温孵育3h后，将混合物磁分离并用PBS清洗后，得到Fe3O4@GO免疫基底；（3）免疫生物芯片的制备：将步骤（2）获得的Fe3O4@GO免疫基底浸入到步骤（1）得到的SERS探针中，室温下孵育2h，接着用浓度为0.01M的PBS清洗掉未连接的SERS探针，得到用于肿瘤标志物CYFRA21-1SERS检测的免疫生物芯片。

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