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申请/专利权人：云南农业大学
摘要：本发明涉及一种基于体细胞核移植技术构建三倍体猪的方法。本发明在体外建立二倍体猪细胞系，以此为核供体进行体细胞核移植，经电融合、电激活后构建克隆胚，检测其克隆胚的体外发育潜力，进一步移植至代孕母猪中继续发育，适时根据B超监测结果获取胎儿，建立胎儿成纤维细胞系进行倍性鉴定及核型分析。以三倍体猪胎儿成纤维细胞为核供体再次体细胞核移植，经电融合、电激活后构建克隆胚，检测其克隆胚的体外发育能力，并进一步移植至代孕母猪体内，生产三倍体猪。本发明克服了猪三倍体胚胎发育效率低、成功率低的问题，对三倍体猪的生产及应用具有重要的意义。
主权项：1.一种基于体细胞核移植技术构建三倍体猪的方法，其特征在于：具体步骤为：1二倍体猪细胞系的建立取二倍体猪组织分离猪细胞系，并进行体外传代培养，建立二倍体猪细胞系作为生产三倍体猪体细胞核移植的供体核；所述细胞系包括不同猪组织、胎儿来源的成纤维细胞系；2猪三倍体胚胎的构建将二倍体猪细胞核供体注射至发育成熟的未去核猪卵母细胞中，经电融合、电激活后获得重构胚，并检测其胚胎发育能力，进一步移植至代孕母猪体内继续发育生产三倍体猪；所述胚胎发育能力的检测指标包括融合率、卵裂率、囊胚率及囊胚细胞数；3猪三倍体的鉴定待移植的代孕母猪妊娠一段时间后，获取胎儿分离成纤维细胞系，进行倍性鉴定及核型分析，鉴定获得三倍体猪胎儿；具体方法为，根据适时B超检测结果获取胎儿分离成纤维细胞系，通过流式细胞仪进行细胞倍性鉴定，利用核型分析确定染色体数目，基于微卫星验证染色体的来源；4猪三倍体的生产以获得的三倍体猪胎儿成纤维细胞为核供体再次进行连续克隆，并检测其克隆胚的发育能力，进一步移植至代孕母猪体内，直到获得成活的三倍体猪个体。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 云南农业大学 一种基于体细胞核移植技术构建三倍体猪的方法
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