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摘要：本发明公开了一种基于SAM与SAH精确定量的CMT3蛋白活性体外检测方法，属于生物技术领域，步骤为：根据蛋白活性特点合成富含CHG序列的双链DNA片段底物和组蛋白肽段；构建体外甲基转移反应体系；反应体系于37℃温育以进行CMT3甲基转移活性体外实验；使用超高效液相色谱与三重四极杆串联飞行时间质谱联用正离子多反应监测模式对反应后体系中的SAM和S‑腺苷同型半胱氨酸进行精确定量，并与仅含TA底物的对照组进行对比以及精确计算，以显示CMT3蛋白的甲基转移活性。本发明提供了一种非放射性、简便快捷的实验手段，为CMT3蛋白等依赖于SAM甲基供体的一系列甲基转移酶活性的快速、准确定量方法提供了新思路。
主权项：1.一种基于SAM与SAH精确定量的CMT3蛋白活性体外检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1）构建含有CMT3纯化蛋白、双链DNA底物、H3K9me2组蛋白肽段和S-腺苷-L-甲硫氨酸的体外甲基转移反应体系；2）将步骤1）构建的反应体系于37℃的条件下进行CMT3甲基转移体外反应；3）采用UPLC-qTOF-MSMS方法对步骤2）反应后体系中的SAM、SAH以及不同浓度梯度的SAM以及SAH标准品进行精确定量；4）根据步骤3）定量结果分析比对，计算体外甲基转移活性。
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百度查询： 浙江大学 一种基于SAM与SAH精确定量的CMT3蛋白活性体外检测方法
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