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摘要：本发明公开了一种基于SPR技术的捕获模式下Cyfra21‑1的免疫活性浓度检测方法，在捕获模式下结合Cyfra21‑1抗体，通过不同流速注射不同浓度的Cyfra21‑1蛋白使用SPR技术测量在部分传质限制下抗体与Cyfra21‑1蛋白的扩散结合速率，结合Cyfra21‑1蛋白的已知扩散系数可以推算出分析物的免疫活性浓度。本发明采用直接分析法和捕获模式下的分析法进行对比来证实捕获模式下分析效果的可靠性。捕获模式下的免疫浓度分析法将proteinG通过胺偶联方法完全覆盖固定在芯片上，通过控制抗体浓度、进样时间和进样流速来获得与直接分析法相同的抗体偶联水平。随后利用数学模型拟合参数，获得Cyfra21‑1的免疫活性浓度。该方法不需要每个抗体耦连一块芯片，可以实现芯片的反复利用，节约检测成本。

主权项：1.一种基于SPR技术的捕获模式下Cyfra21-1的免疫活性浓度检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：将CM5芯片放置到SPR仪器中作为传感芯片，步骤2：将proteinG溶液用不同pH的醋酸钠缓冲液稀释至设定浓度，分别进样到传感芯片上，依据响应值筛选出最佳pH的醋酸钠缓冲液作为ProteinG蛋白稀释液；步骤3：使用EDCNHS活化传感芯片表面，用步骤2筛选得到的最佳pH的醋酸钠缓冲液稀释proteinG溶液至设定浓度，通过控制进样时间使proteinG偶联于芯片，偶联水平控制在5000-15000RU；步骤4：向步骤3所得已耦连ProteinG的SPR芯片上先注入Cyfra21-1抗体溶液进行抗体捕获，再进样Cyfra21-1蛋白溶液，使其与所捕获抗体结合，最后分别采用不同pH的甘氨酸盐酸缓冲液作为再生溶液，进行“捕获-进样-再生”循环，筛选出最佳pH的再生溶液；步骤5：样品免疫活性浓度检测：在步骤3所得已耦连ProteinG的芯片上，先注射Cyfra21-1抗体溶液进行抗体捕获，再注射待测的Cyfra21-1蛋白溶液样品，最后注射步骤4筛选得到的最佳pH的再生溶液进行芯片再生，再生后进行下组样品的检测，每组样品检测均包括抗体捕获、进样样品和再生步骤，芯片重复利用；其中，单个待测的Cyfra21-1蛋白溶液样品以不同流速或不同稀释度进行多组样品检测分析，计算每组样品稀释前的免疫活性浓度，取计算平均值为该个样品的Cyfra21-1蛋白免疫活性浓度。

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百度查询： 中国计量大学 基于SPR技术的捕获模式下Cyfra21-1的免疫活性浓度检测方法