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申请/专利权人:中山大学肿瘤防治中心(中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所)
摘要:本发明公开了基于nanoBRET的促蛋白泛素化降解药物筛选系统及方法。筛选系统包括:荧光蛋白修饰的泛素表达质粒,用于表达荧光蛋白修饰的泛素;内源性泛素基因UBB及UBC敲除的细胞系;以及靶蛋白‑荧光素酶融合蛋白。本发明的一些实例,避免了每次检测前18小时加入小分子荧光底物,同时也避免了小分子荧光底物对细胞造成的毒性影响,使用方便,可以实时监测活细胞中靶蛋白的泛素化水平,结果更加可靠,可以直观反映待筛选化合物对靶蛋白的影响,利于促蛋白泛素化降解药物的高通量筛选。
主权项:1.一种基于生物发光共振能量转移的促蛋白泛素化降解药物筛选系统,包括:荧光蛋白修饰的泛素表达质粒,用于表达荧光蛋白修饰的泛素;内源性泛素基因UBB及UBC敲除的细胞系;以及靶蛋白-荧光素酶融合蛋白。
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