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申请/专利权人：集美大学
摘要：本发明公开了一种基于恒温RCD的检测方法及检测试剂盒，用于高效的生物分析。设计DNA环状模板CT、DNA探针，使目标分析物与DNA结合能释放出起始序列T，该引发链T启动级联杂交反应CHR，产生包含大量重复引发链I序列的DNA纳米线，该引发链I序列可以激活滚环扩增RCA线路，然后RCA生成的大量T序列可以反向激活CHR线路，这导致了大量的引发链T和I的自给自足供应，用于CHR和RCA放大器的连续交叉激活反应，从而导致指数信号放大，达到检测该目标分析物的目的。凭借其灵活的可编程性和模块化功能，RCD放大器可作为通用工具，用于缓冲液和食品样品中卡那霉素的高性能和准确检测，在食品中低丰度污染物的分析领域具有巨大前景。
主权项：1.一种基于恒温RCD的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1：设计DNA环状模板CT、DNA探针：所述DNA探针包括CT、H1、H2、H3、H4；所述CT包括T序列b-a的互补序列a*CT、b*CT和RCA引发链I的互补序列d*、f*两个部分；所述H1包括a*、b*H1、c、bH1、d五个部分，其中b*H1与bH1互补成双链作为所述H1茎部，c为发卡结构的环部，所述H1的3'端接有分裂的I序列片段d；所述H2包括bH2、e、b*H2、c*四个部分，其中b*H2与bH2互补成双链作为所述H2茎部，e为发卡结构的环部；所述H3包括f、e*、b*H3、g、bH3五个部分，其中b*H3与bH3互补成双链作为所述H3茎部，g为发卡结构的环部，所述H3的5'端接有分裂的I片段f；所述H4包括bH4、a、b*H4、g*四个部分，其中b*H4与bH4互补成双链作为所述H4茎部，a为发卡结构的环部；S2：基于恒温RCD反应进行目标分析物的检测：在羟乙基哌嗪乙硫磺酸盐缓冲液中，将所述CT、H1、H2、H3、H4和phi29DNA聚合酶、dNTPs与目标分析物混合，在室温下孵育后，利用荧光光谱仪测量体系的荧光强度；其中，所述目标分析物能与所述DNA探针结合并释放出序列b-a，从而引发RCD。
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权利要求：
百度查询： 集美大学 一种基于恒温RCD的检测方法及检测试剂盒
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