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申请/专利权人:上海市同济医院
摘要:本发明涉及一种小鼠脂肪干细胞外泌体制备方法,包括以下步骤:取对数生长的第3至6代的小鼠脂肪干细胞用含10%FBS的DMEM培养液培养,直到细胞密度达到70%‑80%,换用含10%无外泌体FBS的DMEM培养液继续培养45‑50小时,收集上清培养液,离心除去细胞和细胞碎片,再用100kDa分子量的超滤管于1500‑2500g下离心30min浓缩,将外泌体快速提取试剂加入到浓缩液提取,离心,收集小鼠脂肪干细胞外泌体。本发明的方法显著提高了小鼠脂肪干细胞外泌体的产量和提取效率,且避免了超速离心等外泌体提取方法费时费力、产量低及可能损坏外泌体结构并影响其生物活性的缺陷,所制备的脂肪干细胞外泌体能显著促进小鼠毛发生长。
主权项:1.小鼠脂肪干细胞外泌体在制备防脱发或护发的化妆品中的应用,其特征在于,所述小鼠脂肪干细胞外泌体是按照以下方法制备得到的:a取对数生长的第3至6代的小鼠脂肪干细胞,用10%FBSDMEM培养液培养,直到细胞密度达到70%-80%,吸走原培养液,用PBS清洗,换用含10%无外泌体FBS的DMEM培养液继续在37℃、5%CO2培养箱中培养45-50小时,收集上清培养液;b3000g×15min离心上清培养液以除去细胞和细胞碎片,将上清液转移至100kDa分子量的超滤管中再次1500g离心30min,收集浓缩液;c将外泌体提取试剂加入到浓缩液中,轻轻颠倒混匀,放置4℃下至少12h;d将混合物离心,4℃,1500g×30min,小心弃上清,加入PBS继续离心1500g×5min,吸去残余液体,即得所述小鼠脂肪干细胞外泌体;所述小鼠脂肪干细胞分离自5-10天龄C57BL6小鼠,步骤a中,换用含10%无外泌体FBS的DMEM培养液后继续培养48小时,开始收集上清培养液,步骤a中吸走原培养液后用PBS清洗1-3次。
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