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申请/专利权人：玉溪九洲生物技术有限责任公司

摘要：本发明提供一种马抗蛇毒免疫球蛋白的纯化方法，其特征在于包括下列步骤：A.马免疫血浆的预处理；B.胃酶消化；C.加温变性；D.滤液处理；E.疏水层析；F.超滤；G.原液制备；H.半成品配制分装。采用的疏水层析技术属于吸附层析，与亲和层析、离子交换层析相比，疏水层析在分离过程中，分离介质与蛋白质分子之间的相互作用力较弱，蛋白质在层析分离中不易发生分子结构的激烈改变，不易丧失活性，使制得的马抗蛇毒免疫球蛋白制剂具有：高纯度、高比活性、产品质量更好的特点，且不依赖于高效价的原料血浆，提高血浆的利用率，降低生产成本及生产时间，提高生产效率。

主权项：1.一种马抗蛇毒免疫球蛋白的纯化方法，其特征在于包括下列步骤：A.马免疫血浆的预处理：常温下，将马免疫血浆用0.85％氯化钠水溶液搅拌稀释1.5—2.5倍，然后按110—180gL加入硫酸铵，搅拌10min，调pH至5.5±0.5，静置60—120min；按5—7gL的量，在静置后的混合液中加入硅藻土，充分搅拌后过滤，收集滤液，废弃沉淀；在收集滤液中按120—190gL的量，搅拌加入硫酸铵，调pH至7.0±0.5，静置60—120min；按8—10gL的量，在静置后的混合液中加入硅藻土，充分搅拌后过滤，收集沉淀物，废弃滤液；B.胃酶消化：步骤A的沉淀物用投产血浆量1.5—2.5倍体积的0.85％氯化钠水溶液搅拌溶解，调pH至3.0±0.5，加入胃酶，在温度30±1℃下消化60—120min，得消化液，胃酶加入量为：每升血浆10000—20000个活力单位；C.加温变性：在步骤B的消化液中，按150—230gL的量加入硫酸铵，调pH至5.2±0.5，升温至58±1℃，保持30min，之后降温至35℃以下，又按5—6gL的量加入硅藻土，充分搅拌后过滤，收集滤液，废弃沉淀；D.滤液处理：将步骤C的滤液与a缓冲液按79：1的体积比例混合，调节pH至7.0±0.5，得处理液；所述a缓冲液为：1.6—4M磷酸盐缓冲液，pH7.0±0.5；E.疏水层析：层析柱用b溶液平衡5—10个柱体积，然后将步骤D得到的处理液加载至平衡好的层析柱中，控制加载流速为150—300cmh，加载完毕，用b溶液冲洗层析柱，收集的穿透峰即为马抗蛇毒免疫球蛋白溶液；所述b溶液为0.02—0.05M磷酸盐缓冲液，含1.2—1.8M硫酸铵，pH7.0±0.5；F.超滤：将步骤E所得马抗蛇毒免疫球蛋白溶液澄清过滤后，用30KD或50KD的超滤膜超滤至硫酸铵含量≤1.0gL，得到超滤浓缩液，所用洗滤液为0.85%氯化钠溶液；G.原液制备：将步骤F得到的超滤浓缩液pH调至6.5±0.5，经除菌过滤后，即为原液，置于5±3℃保存；H.半成品配制分装：将G步骤的原液用稀释液稀释至效价≥600Uml，经除菌过滤，分装，得到高纯度、高比活性的马抗蛇毒免疫球蛋白制剂；所述稀释液为0.85％NaCl溶液。

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