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申请/专利权人：锦州医科大学

摘要：一种RT‑RPA‑侧流层析双重检测蜜蜂残翅病毒和黑蜂王台病毒的引物、探针及检测方法，包括：应用于RT‑RAP扩增技术蜜蜂残翅病毒Helicase基因序列的上游引物、中间探针与下游引物和或黑蜂王台病毒VP1基因序列的上游引物、中间探针与下游引物，及其反应体系。使用该检测方法及配合测流层析试纸条能够快速、灵敏、特异地、在非实验室环境下也可以现场检测检测样本中蜜蜂残翅病毒Helicase基因和或黑蜂王台病毒VP1基因。

主权项：1.一种RT-RPA-侧流层析双重检测蜜蜂残翅病毒和黑蜂王台病毒的引物、探针组合，其特征是：具体为具体为检测蜜蜂残翅病毒Helicase基因和或黑蜂王台病毒VP1基因的引物对和探针；其中：残翅病毒Helicase基因的正向引物序列DWV-F为：5’-CTTGAGAAATATCACTTGGCGACGCAACCCCAG-3’；残翅病毒Helicase基因的反向引物序列DWV-R为：5’-Dig-TGAGCAGCCACATTAAGCATATTACACACACCA-3’残翅病毒Helicase基因的探针序列DWV-Probe为；5’-FAM-AGCTCCCAATGCTGAAGCGGAGGAGGCAAGTGCdSpacerTTGGGTATCCATTAT-C3spacer-3’黑蜂王台病毒VP1基因的正向引物序列BQCV-F为：5’-GAAACATTTTACTATAGTTCAGGTCGGAATAA-3’黑蜂王台病毒VP1基因的反向引物序列BQCV-R为：5’-Biotin-CATACCTCAAATCATACACTTTACCTTGTTTTA-3’黑蜂王台病毒VP1基因的探针序列BQCV-Probe为：5’-FAM-CTCGATATAGCCACTTCACCTCCTTCCATCAATCdSpacerCTATTATGCGGTAGGTG-C3spacer-3’；所述以残翅病毒Helicase基因的探针，其DWV-Probe所示序列5’端连接有第一标记分子，3’端连接有防止聚合反应的保护标签，在距离5’端30个碱基左右的位置具有能被DNA损伤修复活性的酶识别并切除的人工碱基；所述黑蜂王台病毒VP1基因的探针，其BQCV-Probe所示序列5’端连接有第一标记分子，3’端连接有防止聚合反应的保护标签，在距离5’端30个碱基左右的位置具有能被DNA损伤修复活性的酶识别并切除的人工碱基；所述残翅病毒Helicase基因的反向引物5’端连接有第二标记分子；黑蜂王台病毒VP1基因的反向引物5’端连接有第三标记分子。所述残翅病毒Helicase基因的探针和正向引物处于同一扩增方向；所述黑蜂王台病毒VP1基因的探针和正向引物处于同一扩增方向；防止聚合反应的保护标签为C3-spacer；能够被具有DNA损伤修复活性的酶识别并切除的所述人工碱基类似物为四氢呋喃THF；所述第一标记分子为荧光分子FAM，第二标记分子为地高辛Dig，第三标记分子为生物素Biotin。

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百度查询： 锦州医科大学 RT-RPA-侧流层析双重检测蜜蜂残翅病毒和黑蜂王台病毒的引物、探针及检测方法