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申请/专利权人：福建农林大学

摘要：本发明公开了一种Raffaelealauricola次级代谢产物的制备方法及其应用，包括：活化菌株，初级培养，次级培养，菌体研磨，乙酸乙酯萃取，浓缩得粗提物，将粗提物进行反相硅胶柱层析，以甲醇：水梯度洗脱，再通过多次200‑300目硅胶柱层析纯化，收集洗脱液浓缩，得到目标产物。经1HNMR、13CNMR、COSY、HMBC、HSQC谱图分析证明A'‑Neogammacer‑21‑en‑15α‑ol首次在该菌种代谢物中提取到。

主权项：1.Raffaelealauricola次级代谢产物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：1）将Raffaelealauricola活化后，取菌块接种到PDB培养基中，在160～180rmin、20~28℃条件下连续培养5~10天，按15wt%~20wt%接种量转接到大米培养基中，继续在20～28℃条件下静置培养28～40天得到菌丝体；2）将步骤1）得到的菌丝体在35~40℃下干燥后研磨成粉状，用1~2倍体积的乙酸乙酯浸泡12~24小时，超声40~60分钟，收集萃取液，残渣中再加入菌丝体1~2倍体积的乙酸乙酯，超声40~60分钟，收集萃取液重复以上步骤，共得到三份萃取液合并浓缩得到粗提物浸膏；3）将粗提物浸膏用氯仿或二氯甲烷溶解，然后用反相硅胶C18进行拌样，干法装柱，以甲醇：水体积比1:9-9:1梯度洗脱，收集甲醇：水体积比为9:1部分洗脱液，旋蒸浓缩获得组分A；4）用1倍体积的氯仿溶解组分A，过200-300目硅胶柱，石油醚：乙酸乙酯体积比为30:1开始梯度洗脱，收集石油醚：乙酸乙酯体积比为10:1部分洗脱液，旋蒸浓缩得浸膏，再过200-300目硅胶柱，以石油醚：氯仿体积比为8:1开始梯度洗脱，收集石油醚:氯仿体积比为4:1部分洗脱液，再过200-300目硅胶柱层析，以石油醚：乙酸乙酯体积比为20:1开始梯度洗脱，收集石油醚：乙酸乙酯体积比为5:1部分洗脱液，旋蒸得到白色粉末状A'-Neogammacer-21-en-15α-ol，其结构式如下所示： ；步骤1）中大米培养基的组成为：大米100g,木屑10g,加入纯水120mL；经121℃高压灭菌20min后使用。

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