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申请/专利权人：湖南一格制药有限公司

摘要：本发明提供一种凝血酶原复合物的纯化方法，包括以下步骤：原料过滤—SD灭活并稀释—凝胶预处理—利用预处理后的DEAEA‑50装柱进行固定床柱层析—超滤浓缩—配液过滤、分装，冻干，得凝血酶原复合物纯化成品。本发明利用过滤罐，对混浆后的原料进行过滤，避免滤网在过滤过程中脱落和产生破裂，提高原料的处理效率，同时利用醋酸铵水溶液对溶胀A‑50凝胶进行预处理，提高溶胶对酸性蛋白的吸附量和吸附强度，在保证产物纯度的同时，可适当提高吸附和洗涤速度，以提高产量。

主权项：1.一种凝血酶原复合物的纯化方法，包括以下步骤：S1、血浆冷沉淀的去除：以新鲜冷藏血浆为原料，经融浆，混浆，过滤，得到粗过滤液；S2、SD灭活并稀释：温和搅拌下将配置好的SD灭活液缓慢加入粗过滤液中，添加完毕后搅拌30min；调整液温为24-26℃，灭活6h；灭活后采取添加稀释液稀释的方法将电导值降至800-1000us，得灭菌稀释液；S3、凝胶预处理：按照1：100的比例称取DEAEA-50干凝胶和蒸馏水，将DEAEA-50干凝胶悬于蒸馏水内，1小时后倾去上层细粒，得溶胀A-50，按0.5N醋酸铵15ml克DEAEA-50干凝胶，将溶胀A-50浸泡于醋酸铵溶液中，搅匀、静置30min，抽滤得预处理A-50，将处理后的预处理A-50浸泡于0.5N醋酸铵溶液中保存；S4、固定床柱层析：将预处理A-50装填在固定床层析柱内，装填好的层析柱使用平衡液平衡2—5个柱体积，灭菌稀释液使用蠕动泵层析柱，上样流速为40—50cmh；上样完成后使用蠕动泵泵入洗涤液进行在线冲洗，洗涤液流速为40—50cmh，冲洗时间40—60min；洗涤后的层析柱使用蠕动泵泵入洗脱液进行洗脱，洗脱液流速为30—40cmh，待在线紫外检测器中的紫外吸收值低于500Au后停止洗脱，收集洗脱液并使用0.45um滤芯过滤，得凝血酶原复合物提取液；S5、超滤浓缩：使用透析液对进行凝血酶原复合物提取液超滤透析，使透析出液端口的电导值低于1000us后进行超滤浓缩，得凝血酶原复合物浓缩液；S6、配液：使用透析液对凝血酶原复合物浓缩液进行稀释，调节活力为30-40IUml，pH7-7.5，使用0.45um滤芯过滤、分装，冻干，得凝血酶原复合物纯化成品。

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