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申请/专利权人：广东生态工程职业学院
摘要：本发明公开了基于CRISPRCas12a的白头鹎冠状病毒检测试剂盒及方法。具体公开了基于CRISPRCas12a的白头鹎冠状病毒检测体系，针对编码白头鹎冠状病毒spikeglycoprotein蛋白的S基因设计特异性gRNA，对靶序列进行荧光标记及切割后，利用荧光定量检测或免疫层析试纸条检测待测样品中是否含有白头鹎冠状病毒。本发明的白头鹎冠状病毒检测方法检测下限为3.43copyμL，与其他常见的鸟类病毒没有交叉反应，具有特异性。本发明的检测体系具有灵敏度高、特异性强、耗时短、不依赖大型实验设备等优势。
主权项：1.一种白头鹎冠状病毒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：提取待测样品中的RNA，并反转录为cDNA；S2：步骤S1所获得cDNA为模板，利用核苷酸序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示的引物进行RPA扩增反应，得到特异性扩增产物；S3：步骤S2中所获得的特异性扩增产物加入CRISPRCas12a检测体系，进行切割反应，获得切割产物；所述的CRISPRCas12a反应体系包括针对白头鹎冠状病毒S基因的特异性gRNA、Cas12a蛋白、ssDNA报告系统；所述的gRNA为核苷酸序列如SEQIDNO.1或SEQIDNO.2所示的gRNA；所述的ssDNA报告系统所修饰的序列为TTATTATT。S4：利用荧光定量检测法或免疫层析试纸条检测待测样品中的白头鹎冠状病毒。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 广东生态工程职业学院 基于CRISPR/Cas12a的白头鹎冠状病毒检测试剂盒及其检测方法
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