买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：北京农学院

摘要：本发明公开了一种液相色谱‑串联质谱LC‑MSMS检测生物胺的方法，属于生物胺检测技术领域。样品经酸化乙腈水溶液均质提取，正己烷脱脂，挥发性离子对反相液相色谱分离，电喷雾源、多反应监测MRM模式串联质谱检测，实现了二甲胺、三甲胺、氧化三甲胺、章鱼胺、多巴胺、酪胺、5‑羟色胺、苄胺、腐胺、尸胺、组胺、胍丁胺、2‑苯乙胺、色胺、亚精胺和精胺等16种生物胺的同步高效定性定量分析。该方法样品处理简单，灵敏度高，有良好的准确度和精密度，为以生物胺为标志物，冷链鱼虾产品品质追踪和品质综合性评价提供了有价值的技术参考。

主权项：1.一种液相色谱-串联质谱检测生物胺的方法，其特征在于，通过挥发性离子对反相液相色谱-串联质谱同步测定二甲胺、三甲胺、氧化三甲胺、章鱼胺、多巴胺、酪胺、5-羟色胺、苄胺、腐胺、尸胺、组胺、胍丁胺、2-苯乙胺、色胺、亚精胺和精胺及其含量，包括以下步骤：步骤A.标准品制备：A1.将生物胺的标准品用甲酸水溶液配制成浓度为10～1000ngmL的系列混合标准品溶液，所述系列混合标准品溶液中含有内标物，所述内标物为二甲基胺-d6和1,7-二氨基庚烷，二者浓度均为180～220ngmL；A2.取所述系列混合标准品溶液，加入九氟戊酸水溶液，混匀，上机检测；所述系列混合标准品溶液和九氟戊酸水溶液的体积比为10:1，九氟戊酸水溶液的浓度为40～60mmolL；步骤B.样品前处理：B1.向样品中加入内标工作液，所述内标工作液中含有二甲基胺-d6和1,7-二氨基庚烷，二者浓度均为80～120μgmL，所述样品与内标工作液的用量比为1.0g:100μL；B2.加入甲酸乙腈水溶液1，以9500～10500rmin的转速均质25～40s，再7000～9000rmin离心5～8min，取上清液；所述甲酸乙腈水溶液1与样品的用量比为10mL:1.0g，所述甲酸乙腈水溶液1中，甲酸的体积浓度为1～5％，乙腈的体积浓度为80～90％；B3.在步骤B2的沉淀中加入甲酸乙腈水溶液2，涡旋25～40s，进行二次提取，再7000～9000rmin离心5～8min，取上清液并与步骤B2的上清液合并，用甲酸水溶液定容，定容体积与所述样品的用量之比为50mL:1.0g；所述甲酸乙腈水溶液2的用量和浓度同所述甲酸乙腈水溶液1；B4.取步骤B3中定容后的提取液，加入正己烷并混匀，液体分层后，取下层提取液过0.22μm有机滤膜，即得样品提取液；取用的提取液与所述正己烷的体积之比为2:3；B5.取所述样品提取液，加入九氟戊酸水溶液，混匀，上机检测；所述样品提取液和九氟戊酸水溶液的体积比为10:1，九氟戊酸水溶液的浓度为40～60mmolL；步骤C.上机检测：C1.色谱条件：色谱柱：T3柱；柱温：35℃；进样量：10μL；流速：0.3mLmin；流动相：A为5mmolL的九氟戊酸水溶液，B为5mmolL的九氟戊酸乙腈溶液；梯度洗脱程序为0～1min，5％～20％B；1～12min，20％～40％B；12～13min，40％～5％B；13～18min，5％B；C2.质谱条件：离子源：ESI+；左右干燥氮气温度：500℃；干燥氮气流量10Lmin；反吹氮气流量：3Lmin；雾化气压力：75.0psi；碰撞气流量：0.4Lmin；ESI喷针高压：5000V；真空接口温度：150℃；多反应监测模式数据采集，16种生物胺和2种内标物的参数如下：二甲胺：母离子46.0mz，子离子46.0mz为定性离子，碰撞能量为0eV；子离子30.6mz为定量离子，碰撞能量为20eV；二甲基胺-d6：母离子52.1mz，子离子34.0mz为定性离子，碰撞能量为26eV；子离子32.0mz为定量离子，碰撞能量为37eV；三甲胺：母离子60.0mz，子离子60.0mz为定性离子，碰撞能量为0eV；子离子44.0mz为定量离子，碰撞能量为29eV；氧化三甲胺：母离子76.0mz，子离子76.0mz为定性离子，碰撞能量为0eV；子离子58.2mz为定量离子，碰撞能量为19eV；章鱼胺：母离子154.1mz，子离子136.0mz为定性离子，碰撞能量为12eV；子离子91.0mz为定量离子，碰撞能量为31eV；多巴胺：母离子154.1mz，子离子137.0mz为定量离子，碰撞能量为16eV；子离子90.5mz为定性离子，碰撞能量为32eV；酪胺：母离子138.1mz，子离子121.0mz为定量离子，碰撞能量为16eV；子离子76.5mz为定性离子，碰撞能量为36eV；5-羟色胺：母离子177.1mz，子离子160.1mz为定量离子，碰撞能量为16eV；子离子132.0mz为定性离子，碰撞能量为30eV；苄胺：母离子108.1mz，子离子90.3mz为定量离子，碰撞能量为16eV；子离子64.4mz为定性离子，碰撞能量为39eV；腐胺：母离子89.1mz，子离子71.8mz为定量离子，碰撞能量为17eV；子离子29.6mz为定性离子，碰撞能量为30eV；尸胺：母离子103.1mz，子离子85.7mz为定量离子，碰撞能量为14eV；子离子68.5mz为定性离子，碰撞能量为21eV；组胺：母离子112.0mz，子离子94.5mz为定量性离子，碰撞能量为21eV；子离子67.5mz为定性离子，碰撞能量为31eV；胍丁胺：母离子131.1mz，子离子131.1mz为定性离子，碰撞能量为16eV；子离子71.6mz为定量离子，碰撞能量为22eV；1,7-二氨基庚烷：母离子131.0mz，子离子114.1mz为定性离子，碰撞能量为15eV；子离子55.0mz为定量离子，碰撞能量为24eV；2-苯乙胺：母离子122.1mz，子离子105.0mz为定量离子，碰撞能量为17eV；子离子76.7mz为定性离子，碰撞能量为39eV；色胺：母离子161.1mz，子离子144.0mz为定量离子，碰撞能量为14eV；子离子116.9mz为定性离子，碰撞能量为35eV；亚精胺：母离子146.1mz，子离子129.1mz为定量离子，碰撞能量为13eV；子离子112.1mz为定性离子，碰撞能量为22eV；精胺：母离子203.2mz，子离子129.0mz为定量离子，碰撞能量为16eV；子离子112.0mz为定性离子，碰撞能量为26eV。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 北京农学院 一种液相色谱-串联质谱检测生物胺的方法