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申请/专利权人：中国医学科学院医药生物技术研究所

摘要：本发明涉及一种筛选新冠病毒主蛋白酶mainprotease,Mpro小分子抑制剂的方法及筛选模型。该方法及筛选模型基于荧光偏振fluorescencepolarization原理，以荧光探针FITC‑Substrate‑Biotin作为新冠病毒Mpro的水解底物，再以亲和素avidin终止其水解反应，以多功能酶标仪检测实验体系的毫偏值millipolarizationunits,mP。活性化合物在本筛选模型中表现较高的mP值，非活性化合物则表现较低的mP值。

主权项：1.一种用于筛选新冠病毒主蛋白酶（mainprotease,Mpro）小分子抑制剂的方法，所述的方法包括如下步骤：（1）以大肠杆菌原核表达方法制备高活性Mpro重组蛋白；（2）添加待筛选化合物与Mpro重组蛋白共同孵育；步骤（2）中，将浓度为100～2000nM的Mpro重组蛋白溶液与浓度为1～5mM的待筛选化合物按比例混合后，在室温下共同孵育20～60min；（3）以异硫氰酸荧光素（fluoresceinisothiocyanate,FITC）和Biotin标记的FITC-Substrate-Biotin多肽作为Mpro水解底物，在室温下共同孵育5～60min；所述Biotin标记的FITC-Substrate-Biotin多肽为FITC-AVLQSGFRKK-Biotin；步骤（3）中，FITC-Substrate-Biotin浓度为20～100nM，加入的FITC-Substrate-Biotin溶液的体积为步骤（2）的体系的12～11（vv）；加入FITC-Substrate-Biotin后，室温孵育5～40min；（4）以亲和素终止水解反应，在室温下共同孵育1～30min，以多功能酶标仪检测mP值；步骤（4）中，亲和素浓度为10～500nM，加入的亲和素溶液的体积为步骤（2）的体系的16～11（vv）；加入亲和素后，室温孵育1～10min，以多功能酶标仪检测mP值；（5）绘制目标化合物的抑制曲线，计算目标化合物对新冠病毒主蛋白酶的IC50值；所述的新冠病毒主蛋白酶的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。

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权利要求：

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