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毕赤酵母工程菌株C30及其应用 

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摘要:本发明属于工业微生物应用技术领域,涉及利用毕赤酵母rDNA位点的重复特性倍增重组人源乌司他丁与血清白蛋白融合蛋白编码基因rh‑UTI以及分子伴侣蛋白编码基因PDI表达框,提高重组人源乌司他丁与血清白蛋白融合蛋白产量的方法及其应用。本发明成功筛选获得了含有4个拷贝rh‑UTI基因的工程菌株。通过摇瓶发酵,目标融合蛋白的表达量达到639.46μgmL。

主权项:1.毕赤酵母工程菌株C30,其与出发菌株相比,具有在rDNA的重复位点倍增rh-UTI基因表达框、PDI基因表达框以及抗性筛选基因Zeocin的特点;所述rDNA重复位点包括一个35S单元框和一个rDNA非转录间隔序列;所述rh-UTI基因表达框包括强启动子PAOX1、基因rh-UTI和终止子AOXTT;所述基因rh-UTI序列如序列表SEQIDNO.1所示;所述PDI基因表达框包括组成型启动子PTEF1、分子伴侣PDI基因和终止子AOXTT;所述分子伴侣PDI基因序列如序列表SEQIDNO.2所示;所述抗性筛选基因Zeocin包括组成型启动子PTEF1和Zeocin抗性基因;所述出发菌株为毕赤酵母GS115。

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