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摘要：本发明公开一种临床级混合型免疫细胞的制备方法，其步骤包括：采用淋巴细胞分离液从外周血中分离出单个核细胞；完全培养基A液悬浮单个核细胞，混匀后，置于培养箱内培养；培养后，向培养液中添加等体积的完全培养基B液，混匀后，置于培养箱内继续培养；每2至3天根据细胞计数结果等体积补充完全培养基C液；培养16天后，获得CD3‑CD56+、CD3+CD56+为主要效应细胞的混合免疫细胞群。本发明的技术方案能够提供了一种含有NK和CIK的混合型免疫细胞，是由单个核细胞经过体外诱导、扩增培养获得的大量具有多种免疫活性的免疫细胞群，包含CD3‑CD56+细胞群、CD3+CD56+细胞群。其制备工艺简单、有效成分稳定、细胞毒性高、成本低等特点，弥补了多种免疫细胞联合治疗的空缺。
主权项：1.一种临床级混合型免疫细胞的制备方法，其特征在于，其步骤包括：采用淋巴细胞分离液从外周血中分离出单个核细胞；完全培养基A液悬浮单个核细胞，混匀后，置于培养箱内培养；培养后，向培养液中添加等体积的完全培养基B液，混匀后，置于培养箱内继续培养；每2至3天根据细胞计数结果等体积补充完全培养基C液；培养16天后，获得CD3-CD56+、CD3+CD56+为主要效应细胞的混合免疫细胞群；所述完全培养基A液由含有1μgml~5ugml的CD16单抗的SCGMNK培养基、20μgml~100μgml的力尔凡及2%~5%的血清替代物组成；所述完全培养基B液包括：10μgml~100ugml胸腺法新、1000μgml~5000Uml的IL-2、10μgml~100ngml的IL15及2%~5%的血清替代物；所述完全培养基C液包括：1%~3%的血清替代物、1000μgml~2000Uml的IL-2及1μgml~10ugml的LacNAC。
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