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申请/专利权人：天津科技大学
摘要：本发明提供了谷氨酸棒杆菌CRISPRCpf1高效基因组编辑技术，先整合后诱导切割，将重组和切割事件分离，采用双质粒系统pEC‑XK99E衍生质粒表达RecET和Cpf1置于感受态细胞中，兼容的pXMJ19质粒表达crRNA和提供供体DNA分子，提高了供体DNA模板的装载量，解决了谷氨酸棒杆菌大片段整合难题，同时整体提高了基因组编缉效率，为大片段基因组插入提供了可能，也为谷氨酸棒杆菌代谢工程研究和菌株构建提供了技术保障。
主权项：1.一种谷氨酸棒杆菌CRISPRCpf1基因组编辑方法，其特征在于：步骤如下：（1）将携带Cpf1和RecET表达元件的质粒制备在感受态细胞中，然后电转另一个携带供体DNA和crRNA表达元件的质粒；（2）在谷氨酸棒杆菌中引入异源重组酶RecET，由于RecET的表达，转化第二个质粒后，在Cpf1不诱导的情况下，供体DNA能够高效重组到染色体上，再将谷氨酸棒杆菌复苏液涂布到添加诱导剂的固体培养基中，Cpf1的表达使得未重组细胞基因组切割致死。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 天津科技大学 谷氨酸棒杆菌CRISPR/Cpf1基因组编辑技术
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