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申请/专利权人：上海澳斯康生物制药有限公司
摘要：本申请提供了一种将贴壁Marc145细胞驯化成悬浮细胞的方法，通过潮霉素抗性基因加压筛选得到稳定表达Siat7e基因的抗性细胞株，并在无血清培养基中经过单细胞的驯化实现了全悬浮细胞的增殖，经过有限稀释挑选获得了高产并且可持续性稳定传代生长的全悬浮Marc145单克隆细胞系。本申请的Marc145悬浮细胞在无血清培养基中通过优化谷氨酰胺、谷氨酸、天冬氨酸及天冬酰胺等关键成分，可以有效提高细胞生长细胞密度，悬浮培养可实现最高细胞密度达6.0×106cellsmL~8.0×106cellsmL，本申请的方法为Marc145细胞的悬浮培养以及工业化生产疫苗奠定了基础，也为猪蓝耳灭活疫苗的工业化大生产提供了新的途径。
主权项：1.一种悬浮培养Marc145细胞株的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：构建稳定表达Siat7e基因的贴壁型Marc145细胞株，以及，将所述稳定表达siat7e基因的贴壁型Marc145细胞株驯化培养，将贴壁型Marc145细胞株驯化成悬浮型Marc145细胞株；其中，驯化培养包括以下步骤：步骤S1、将所述稳定表达siat7e基因的贴壁型Marc145细胞株在含有抗性筛选药物的完全培养基中贴壁培养；步骤S2、将步骤S1传代后的贴壁型细胞株消化离心后接种在含有抗性筛选药物和1.5vv%~2.5vv%的新生牛血清的无血清培养基中悬浮培养；步骤S3、将步骤S2培养后的细胞接种在含有抗性筛选药物和0.5vv%~1vv%的新生牛血清的无血清培养基中悬浮培养；步骤S4、将步骤S3培养后的细胞接种在含有抗性筛选药物的无血清培养基中悬浮培养；步骤S5、将步骤S4培养后的细胞接种在无血清培养基中悬浮培养。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 上海澳斯康生物制药有限公司 悬浮培养Marc145细胞的方法
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