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申请/专利权人：南京大学
摘要：本发明属于基因工程技术领域，涉及两种Pparg基因定点突变小鼠模型的构建和应用。本发明运用CRISPRCas9基因编辑技术，对Pparg基因的编码第166位苏氨酸的位置进行人工突变，并以此成功制作了两种定点突变小鼠品系。本发明亦基于获得的Pparg基因定点突变小鼠品系，通过多种细胞、生化、分子生物学的研究手段，分析了这两种品系的多种生理与病理状态、确定了其用于相关研究的应用价值。同时，Pparg基因定点突变小鼠可用于相关药物的筛选、药物设计、药理毒理学、药效学、药物代谢动力学以及治疗靶标发掘的应用。
主权项：1.一种Pparg基因定点突变小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：第1步：设计识别特定基因组PAM区域的gRNA序列，其序列如序列表SEQIDNo.1所示；第2步：构建Cas9打靶载体和donor载体，DonorDNA序列如SEQIDNO.3所示；第3步：将Cas9打靶载体、gRNA及donor载体显微注射到C57BL6J小鼠的受精卵进行同源重组，并移植给代孕母鼠，获得F0代小鼠；第4步：经PCR和测序验证阳性的F0代小鼠与C57BL6J小鼠交配获得可稳定遗传的F1代小鼠模型。第5步：经PCR和测序验证阳性的F1代小鼠进行杂交，利用PCR测序筛选纯合子突变小鼠。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南京大学 Pparg基因定点突变小鼠模型的构建与应用
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