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申请/专利权人:华中农业大学
摘要:本发明涉及物技术领域,具体涉及一种高表达猫疱疹病毒Ⅰ型gD蛋白的CHO‑FHV‑gD细胞株构建方法及其应用,本发明对猫疱疹病毒Ⅰ型gD基因密码子进行优化,构建重组质粒,转染至CHO细胞,通过三轮连续加药筛选,获得高表达猫疱疹病毒Ⅰ型gD蛋白的CHO‑FHV‑gD细胞株,构建的CHO‑FHV‑gD细胞株目的蛋白表达量高。培养CHO‑FHV‑gD细胞,收获细胞培养上清液,进行NTA纯化后,将抗原水相与佐剂混合后乳化制备疫苗。该疫苗安全性好、免疫原性强、生产成本低、工艺简单、批次稳定。基于该蛋白研发抗原夹心荧光微球试纸条抗体检测技术,对于该病防控具有重大意义。
主权项:1.一种高表达猫疱疹病毒Ⅰ型gD蛋白的CHO-FHV-gD细胞株构建方法,其特征在于:包括以下步骤1将含有编码gD蛋白的核苷酸序列插入到PXC17.4载体上,并在其上游和下游插入8×His标签,得到重组质粒PXC17.4-FHV-gD;其中,核苷酸序列如SEQIDNO:1所示;2将重组质粒PXC17.4-gD转染至CHO细胞,获得PXC17.4-FHV-gD细胞株,即为CHO-FHV-gD细胞株。
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百度查询: 华中农业大学 高表达猫疱疹病毒Ⅰ型gD蛋白的CHO-FHV-gD细胞株构建方法及其应用
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