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申请/专利权人：湖南大学

摘要：本发明公开了一种反斯托克斯时间分辨荧光微球及其制备方法，制备方法包括以下步骤：先制备单线态氧光敏剂包覆微球，再加入铕配合物和有机物进行反应，得到反斯托克斯时间分辨荧光微球。本发明的制备方法以聚苯乙烯微球为基础，利用溶胀原理包覆单线态氧光敏剂，而后加入能与单线态氧光敏剂产生发光能量转移的有机物以及铕配合物进行反应，最终得到反斯托克斯时间分辨荧光微球。本发明的反斯托克斯时间分辨荧光微球能在680nm光激发下发出强烈而稳定的615nm荧光，具有分散性好、稳定性强且灵敏度更高等优点，能成功应用于免疫分析。

主权项：1.一种反斯托克斯时间分辨荧光微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将聚苯乙烯微球分散于有机溶剂中，加入单线态氧光敏剂，在25℃～110℃下进行反应，反应后加入乙醇，经洗涤，将洗涤产物分散于水中，得到单线态氧光敏剂包覆微球；所述单线态氧光敏剂包括亚甲基蓝、四磺酸酞菁锌、铜酞菁-3,4',4'',4'''-四磺酸四钠盐和二羟基硅酞菁中的至少一种，所述聚苯乙烯微球为氨基化聚苯乙烯微球，所述聚苯乙烯微球中的粒子数与单线态氧光敏剂中的粒子数的比例为1∶107～1010，所述聚苯乙烯微球的浓度为1.5×1011粒子数mL～4.5×1011粒子数mL；S2、将步骤S1得到的单线态氧光敏剂包覆微球、铕配合物、有机物和有机溶剂混合，所述有机物为能与单线态氧光敏剂产生发光能量转移的有机物，超声，在室温下进行反应，所得产物经旋蒸、洗涤，得到反斯托克斯时间分辨荧光微球；所述有机物为4-2-苯基-5,6-二氢-1,4-噁噻己环-3-基-N,N-二十四烷基苯胺或二甲基噻吩衍生物，所述铕配合物、有机物和单线态氧光敏剂包覆微球的粒子数比例为107～1010∶107～1010∶1；所述铕配合物的制备方法包括以下步骤：（1）将氯化铕溶于有机溶剂中，得到氯化铕溶液；所述有机溶剂为乙醇；（2）将2-噻吩甲酰三氟丙酮和三苯基氧膦溶于有机溶剂中，得到混合溶液；所述有机溶剂为乙醇；（3）将步骤（2）得到的混合溶液滴加入步骤（1）得到的氯化铕溶液中，调节pH值至6.5～6.8，进行加热反应，静置，经过滤、洗涤、干燥，得到铕配合物；所述氯化铕、2-噻吩甲酰三氟丙酮和三苯基氧膦的摩尔比为1∶3～5∶2～4；所述滴加在搅拌条件下进行，所述调节pH值采用的是氢氧化钠溶液，所述加热反应的温度为60℃～70℃，所述加热反应的时间为6h～8h。

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