买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

摘要：本发明适用于生物医用材料技术领域，提供了一种交联重组胶原蛋白及其制备方法和应用，本发明结合了重组技术与交联技术，成功制备出了一种新型生物材料。该材料以重组胶原蛋白为核心基础，通过与γ‑PGA进行交联，形成具有一定力学属性的交联物，利用EDC和NHS作为交联剂，所得交联产品具有优异的力学性能和生物相容性，并且交联效果显著，残留物少。重组胶原蛋白与γ‑PGA交联后的材料表现出良好的弹性和机械强度，适用于多种生物医学应用，具有潜在的市场应用价值，特别是在医美和生物工程领域。

主权项：1.一种交联重组胶原蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、通过生物信息学方法设计并优化得到重组人源III型胶原蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，将通过密码子偏好性优化后的重组人源III型胶原蛋白基因插入表达载体，使用EcoRI和HindIII双酶切连接，完成重组载体的构建；步骤2、选择合适的真核表达系统，将构建好的表达载体转染至选定的真核宿主细胞中；利用选择标记筛选阳性克隆；从阳性克隆中挑选高表达候选株进行摇瓶培养，细胞密度达到要求后转移至3L发酵罐，在3L发酵罐中通过补加培养基保持细胞密度，细胞密度达到目标后降温进行蛋白表达，并检测发酵上清液中的蛋白质表达量；步骤3、收集发酵上清液，离心去除细胞碎片，对表达的蛋白进行纯化；使用适当方法对纯化后的蛋白进行验证；步骤4、将纯化后的蛋白透析到注射用水中，使用超滤管浓缩胶原蛋白溶液，进行冻干处理，包括预冻、升华干燥和解析干燥；步骤5、将冻干后的胶原蛋白溶解在20mM磷酸盐缓冲液或0.1MMES缓冲液中；将γ-PGA溶解在0.1MMES缓冲液中，加入NHS和EDC，将溶液在室温下孵育1小时，活化γ-PGA的羧基；将活化后的γ-PGA溶液等量加入到胶原蛋白溶液中，混合均匀；在4-35℃下进行交联反应，反应时间为1-24小时，即得交联重组胶原蛋白；通过100倍体积的20mM磷酸盐缓冲液透析，每24小时换液一次，重复3次，过程在4℃下进行；将交联反应后的产物进行冷冻干燥处理，得到海绵状物；将海绵状物粉碎成颗粒，并置于100-1000倍体积的生理盐水或注射用水中进行清洗，清洗过程中多次换液，清洗过程在4-25℃下进行；将清洗后的颗粒溶胀于生理盐水中，使交联重组胶原蛋白的含量达到35mgmL。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 吉林大学 一种交联重组胶原蛋白及其制备方法和应用