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申请/专利权人：黑龙江省科学院高技术研究院
摘要：一种小黑杨叶肉原生质体制备及转化方法，它涉及植物细胞工程领域，本发明通过优化酶解液组合、甘露醇浓度以及酶解时间等，有效获得了高产量和高活力的小黑杨叶肉原生质体；通过优化质粒质量、PEG4000浓度以及转化时间等，有效建立了小黑杨叶肉原生质体瞬时转化系统。本发明涉及到的原生质体制备过程可以采用植物材料的幼嫩部位无需预处理、操作简单、所需时间较短，获得的高质量的黑杨叶肉原生质体为后续进行亚细胞定位提供了材料，建立的小黑杨叶肉原生质体遗传转化体系也为进一步研究小黑杨关键功能基因奠定基础。
主权项：1.一种小黑杨叶肉原生质体制备方法，其特征在于它包括以下步骤：1取小黑杨组培苗的幼嫩叶片，吸干叶片表面水分，将叶片切成细条；2将叶片细条远轴面朝下置于酶解液中分散开；3将装有酶解液的培养皿密封，在恒温摇床中避光摇动酶解促进原生质体释放；4用筛网过滤去除未酶解的叶片组织，离心去除酶解液，混匀沉淀，加入与剩余溶液等体积的W5溶液，洗涤原生质体两次后冰上静置30min；5加入MMG溶液洗涤原生质体一次，离心收集原生质体沉淀，用MMG溶液重悬混匀；即得小黑杨叶肉原生质体。
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权利要求：
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