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申请/专利权人：天津创源生物技术有限公司

摘要：本发明提供副干酪乳酪杆菌IOB413后生元粉活性成分的制备方法及应用，依据该方法所得到副干酪乳酪杆菌IOB413后生元粉活性物质，对幽门螺旋杆菌以及肠炎沙门氏菌等具有较好的抑制和杀灭效果，但在一定使用剂量下对肠道中的正常菌群或益生菌无明显影响，因此，与目前常用抗生素相比，该活性产物的选择性更强、副作用更小，在治疗幽门螺旋菌感染、肠炎沙门氏菌感染等肠胃疾病以及金黄色葡萄球菌感染方面具有良好的作用。此外，该活性物质对蛋白酶敏感，易被蛋白酶所降解，因此服用后，流经肠胃时，易被肠胃中的胃蛋白酶、糜蛋白酶以及胰蛋白酶所降解，不易形成残留，因此不易对人体产生副作用也不会对环境造成不利影响。

主权项：1.一种副干酪乳酪杆菌IOB413后生元粉活性成分的制备方法，其特征是，具体步骤为：（1）副干酪乳酪杆菌IOB413的培养和发酵后生元粉的制备；（2）发酵后生元粉活性成分的大孔吸附层析法和阳离子交换法分离；（3）发酵后生元粉活性成分的活性验证；（4）发酵后生元粉活性成分的理化性质分析；步骤（1）包括：菌种活化和发酵培养，种子的最佳种龄为20-24h，发酵为固态发酵，固态发酵培养基采用大豆粉，料水比为1：1.75，接种量为5×107CFUmL，发酵时间为32h，干燥及粉碎，干燥温度在55-60℃，粉碎温度-100℃，主机转速50Hz，风机38Hz，进料速度15Hz，出料25Hz，粉末细度300目到500目；步骤（2）中，大孔吸附层析法分离活性物质的操作步骤为：a.XAD-16N大孔吸附树脂预处理；b.柱子平衡预处理；c.将经低温粉碎后的IOB413后生元成品与纯净水按1：3混匀，离心取上清液，以4mLmin的流速流过XAD-16N大孔吸附树脂，去除未吸附的上清液，再用2倍柱体积的20%的乙醇，以2mLmin的流速洗脱大孔树脂上吸附的物质，并收集洗脱液；步骤（2）中，阳离子交换法分离活性物质的操作步骤为：d.从XAD-16N大孔吸附树脂中粗分离获得洗脱液；e.将粒径50-75µm的阳离子交换填料SKI-20预处理后进行湿法装柱并清洗；f.20mM醋酸钠，pH4.0的缓冲液继续冲3-5个柱体积来平衡层析柱；g.平衡后上样品，用缓冲液冲洗掉柱子上未结合杂蛋白，然后用20mM醋酸钠+0.2M氯化钠的洗脱液进行洗脱，收集洗脱液；发酵产物中活性成分易被人体分泌的蛋白酶所降解，并对金黄色葡萄球菌的杀菌率可达99.98％，对幽门螺旋杆菌、肠炎沙门氏菌、产气荚膜菌的杀灭率也可达到60％以上；副干酪乳酪杆菌IOB413（Lacticaseibacillusparacasei）分离自天然发酵酸面团中，于2018年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，其保藏编号为CGMCCNo.16022。

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