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申请/专利权人：中国科学院合肥物质科学研究院;合肥中科易康达生物医学有限公司

摘要：本发明公开同时检测对虾WSSV、IHHNV、EHP、SHIV多重荧光PCR检测试剂盒，包括冻干固态PCRMix，液态复溶Buffer、冻干固态阴性对照和冻干固态阳性对照，所述冻干固态PCRMix含有WSSVVP644基因、IHHNVNS2基因、EHP18s基因和SHIVMCP基因对应的特异性引物探针序列组；所述引物和探针的序列如SEQIDNO:1‑12所示。本发明还提供使用上述试剂盒检测对虾WSSV、IHHNV、EHP、SHIV的方法。本发明提供的试剂盒采用全预混冻干多重荧光PCR法，能够同时检测对虾WSSV、IHHNV、EHP、SHIV这四种病原体，大大节约的检测时间，具有灵敏度高、操作技术要求低和防污染等优点。

主权项：1.同时检测对虾WSSV、IHHNV、EHP、SHIV多重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：包括冻干固态PCRMix，液态复溶Buffer、冻干固态阴性对照和冻干固态阳性对照，所述冻干固态PCRMix含有WSSVVP644基因、IHHNVNS2基因、EHP18s基因和SHIVMCP基因对应的特异性引物探针序列组；所述冻干固态PCRMix含有WSSV上游引物序列如SEQIDNO:1所示，下游引物序列如SEQIDNO:2所示，探针序列如SEQIDNO:3所示；IHHNV上游引物序列如SEQIDNO:4所示，下游引物序列如SEQIDNO:5所示，探针序列如SEQIDNO:6所示；EHP上游引物序列如SEQIDNO:7所示，下游引物序列如SEQIDNO:8所示，探针序列如SEQIDNO:9所示；SHIV上游引物序列如SEQIDNO:10所示，下游引物序列如SEQIDNO:11所示，探针序列如SEQIDNO:12所示；具体核苷酸序列如下：WSSV引物探针序列为：上游引物SEQIDNO:1：5’-CAATGGTCCCGTCCTCATCT-3’下游引物SEQIDNO:2：5’-AGCTGCCTTGCCGGAAA-3’探针SEQIDNO:3：5’-AGCCATGAAGAATGCCGTCTATCACACACT-3’；IHHNV引物探针序列为：上游引物SEQIDNO:4：5’-CCATTACAGATCATGGTGACCACT-3’下游引物SEQIDNO:5：5’-GTAACTCCCAAATAGGCGAGG-3’探针SEQIDNO:6：5’-CGGACACCCAACCAATAAGACCAGA-3’；EHP引物探针序列为：上游引物SEQIDNO:7：5’-GGGCAAAGAATGAAATCTCAAGA-3’下游引物SEQIDNO:8：5’-CCCAGATACGTCTAAGAGCATCG-3’探针SEQIDNO:9：5’-CACCTGGACCAACGGAGGCGAA-3’；SHIV引物探针序列为：上游引物SEQIDNO:10：5’-TGGACCAAACATTTGGATTGG-3’下游引物SEQIDNO:11：5’-TTACGACATCAGGTTCCAGAGAAC-3’探针SEQIDNO:12：5’-TTCCTGACACCGAAGAAGAGAGCCTT-3’。

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