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申请/专利权人：华中科技大学同济医学院附属同济医院

摘要：本申请涉及生物样品检测领域，尤其涉及一种利用液相色谱串联质谱检测尿液游离皮质醇的方法；包括：将定标品溶液和待测尿液样本分别与皮质醇同位素内标工作溶液进行混合，后进行离心，取上清液，分别得到定标品上清液和待测样本上清液；采用液相色谱串联质谱对定标品上清液进行检测，并绘制标准曲线；采用液相色谱串联质谱对待测样本上清液进行检测，并根据所述标准曲线得到待测尿液样本游离皮质醇的含量；其中，皮质醇同位素内标工作溶液的溶质包括皮质醇‑d和或皮质醇‑13C；本发明前处理简单、样本用量小、试剂耗材成本低，有利于实现规模化的液相色谱串联质谱检测尿液游离皮质醇。

主权项：1.一种利用液相色谱串联质谱检测尿液游离皮质醇的方法，其特征在于，所述方法包括：将定标品溶液和待测尿液样本分别与皮质醇同位素内标工作溶液进行混合，后进行离心，取上清液，分别得到定标品上清液和待测样本上清液；采用液相色谱串联质谱对所述定标品上清液进行检测，并绘制标准曲线；采用液相色谱串联质谱对所述待测样本上清液进行检测，并根据所述标准曲线，得到待测尿液样本游离皮质醇的含量；其中，所述皮质醇同位素内标工作溶液包括皮质醇同位素内标溶质和皮质醇同位素内标溶剂；所述皮质醇同位素内标溶质包括皮质醇-dm和或皮质醇-13C；其中，在皮质醇同位素内标溶质包括皮质醇-dm的情况下，m≥3；所述皮质醇同位素内标溶剂包括甲醇和或水；所述液相色谱串联质谱中液相色谱的条件如下：色谱柱：Kinetex-C18色谱柱；所述Kinetex-C18色谱柱的规格满足：100×3.0mm,2.6µm,100Åporesize,Phenomenex,Torrance,CA,USA；柱温：40℃；进样量：5μL；流速：0.4mLmin；流动相A为质量分数为0%～0.1%的甲酸水溶液，流动相B为质量分数为0%～0.1%甲酸的甲醇溶液；所述液相色谱串联质谱中液相色谱使用梯度洗脱方式进行色谱分离，所述梯度洗脱为：0～2.80min，流动相A的体积百分比为35%，流动相B的体积百分比为65%；2.81min，流动相A的体积百分比降为0%，流动相B的体积百分比升高为100%；2.81min～3.50min，流动相A的体积百分比为0%，流动相B的体积百分比为100%；3.51min，流动相A的体积百分升高为35%，流动相B的体积百分比为升高为65%；3.51min～4.50min，流动相A的体积百分比为35%，流动相B的体积百分比为65%。

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