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摘要:本发明属于生物制备的技术领域,具体是指一种高纯度水溶性酵母β‑葡聚糖及其制备方法,该方法以废酵母泥为原料,通过细胞壁裂解、密度梯度离心等方法获得纯净完整的酵母细胞壁,又利用二甲基亚砜辅助纯化有效去除前述步骤所得样品中94.60%的杂质后结合乙醇醇沉降解,最终得到高纯度水溶性酵母β‑葡聚糖产品。该产品的纯度最高为99.5%,易溶于水,重均分子量在9549‑83621Da之间,分子量低且相对均一,具有较好的生物活性。
主权项:1.一种制备高纯度水溶性酵母β-葡聚糖的方法,其特征在于,所述高纯度水溶性酵母β-葡聚糖的纯度最高为99.5%,重均分子量在9549-83621Da之间;包括以下步骤:(1)将EDTA和2-巯基乙醇混合后,向其中加入废酵母泥进行第一次保温,离心得沉淀A;(2)将蜗牛酶和山梨醇溶于柠檬酸-磷酸缓冲液得到混合溶液,然后向其中加入沉淀A进行第二次保温,离心得沉淀B,向沉淀B中加水,得到混悬液;(3)向离心管中加入密度梯度介质,然后加入步骤(2)的混悬液进行密度梯度离心,收集从上向下第二条带的内容物,经水洗、离心,得沉淀C,干燥沉淀C,得到酵母细胞壁;(4)向步骤(3)的酵母细胞壁中加水并进行第三次保温,离心得沉淀D,然后将沉淀D加入到NaOH溶液中进行第四次保温,离心得沉淀E,再将沉淀E进行酶处理,得到处理物;(5)将步骤(4)的处理物溶于二甲基亚砜,离心,收集上清液;(6)向步骤(5)的上清液中加入乙醇并静置,离心得沉淀E,再将沉淀E加水溶解,经浓缩、干燥,即得高纯度水溶性酵母β-葡聚糖;所述步骤(2)中沉淀A与混合溶液的质量体积比为1g:4mL;混合溶液中蜗牛酶的浓度为7.5mgmL,山梨醇的浓度为1M,柠檬酸-磷酸缓冲液的浓度为0.02M、pH=5.8;第二次保温的温度为30℃、时间为40-60min;沉淀B与水的质量体积比为1g:1mL;所述步骤(3)中密度梯度介质的密度为1.62gmL、1.55gmL、1.48gmL和1.41gmL,密度梯度介质为蔗糖、氯化铯或氯化钠中的任一种;密度梯度介质与混悬液的体积比均为4:1;密度梯度离心的转速为3000rmin、时间为15-20min。
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