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申请/专利权人：东南大学
摘要：本发明公开了一种末端修复驱动的二次体外转录机器用于单分子检测人类癌症中碱性磷酸酶水平，属于生物分析技术领域。本发明将HP1和样品溶液混合以进行ALP催化的HP1中磷酸基团的去除，去磷酸化后，添加HP2、信号探针、T7RNA聚合酶、TaqDNA连接酶、DSN、NTPs、RNase进行孵育后，检测样品中的碱性磷酸酶水平；基于ALP催化去磷酸的高特异性、二次体外转录级联的高扩增效率和单分子检测的高信噪比，该方法有好的特异性和超高的灵敏度。可以用于评估动力学参数，筛选潜在的抑制剂，量化各种癌细胞和人类血清中的ALP水平，该方法对ALP的检测限可分别达到体外7.93×10‑8UμL和体内1个细胞。
主权项：1.一种用于检测人类癌症中碱性磷酸酶水平的生物传感器，其特征在于，所述传感器包括：发夹探针1HP1、发夹探针2HP2、信号探针、T7RNA聚合酶、TaqDNA连接酶、DSN、NTPs、RNase；将发夹探针1HP1和样品溶液混合以进行ALP催化的HP1中3′-PO4基团的去除，去磷酸化后，添加发夹探针2HP2、信号探针、T7RNA聚合酶、TaqDNA连接酶、DSN、NTPs、RNase进行孵育后，检测样品中的碱性磷酸酶水平；所述发夹探针1HP1序列为：5′-CTGTTCGTGTTTTACTTGCCTGTGAAGTTTTTTTTTCTTCACAGGCAAGT-P-3′；所述发夹探针2HP2序列为：5′-P-AAAACACGAACAGGCAACCAACCCTATAGTGAGTCGTATTATTTTTTAATACGACTCACTATAGGG-3′；所述信号探针序列为：5′-BHQ1-AAGTAAAACACGAACAGGCAAC-FAM-3′；在发夹探针HP1和HP2中，“P”表示磷酸基团修饰；在信号探针中，3′端和5′端分别用FAM和BHQ1修饰。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 东南大学 一种末端修复驱动的二次体外转录机器用于单分子检测人类癌症中碱性磷酸酶水平
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